一般讲，诊断软下疳要特别谨慎，因为目前本病并不常见，但是如符合如下条件者可以作出诊断。
(1)发病前有不洁性交史。
(2)男女生殖器及尿道口出现一个或更多的溃疡，基底软，有疼痛与触痛。
(3)单侧腹股沟横痃，疼痛，溃疡排脓。
(4)暗视野检查梅毒螺旋体阴性。
(5)涂片作姬姆萨染色查不到多诺万小体(由日本人宫川发现的一种导致性病淋巴肉芽肿的致病菌)。
(6)梅毒血清试验阴性。
(7)革兰氏染色，可查到阴性链球菌，但可产生假阳性，有条件者可作细养。
